Текст книги "Полный справочник медицинской аппаратуры"

Автор книги: авторов Коллектив

сообщить о нарушении

Текущая страница: 12 (всего у книги 41 страниц)

Общие характеристики

Проточный цитометр EPICS 4 XL – позволяет работать с четырехцветной меткой, т. е. определять в одной пробе сразу 4 параметра с использованием одного источника света – аргонового лазера. Это существенно удешевляет конфигурацию прибора и облегчает задачу оператора. Устраняется необходимость введения временной задержки, устанавливаемой при проведении четырехцветного анализа на приборе с двумя лазерами.

Скорость анализа составляет до 10 000 клеток в секунду, что позволяет получить статистически достоверную информацию о морфологии клеток, их поверхностных антигенах, внутриклеточных ферментах, содержании ДНК и т. д.

Производительность прибора – 90 образцов в ч. Станции Q-Prep и DNA-Prep позволяют автоматизировать пробоподготов-ку для иммунофенотипирования лейкоцитов и ДНК-анализа. Автоматическое устройство Q-Prep проводит приготовление суспензии клеток для анализа за 35 с. Использование безотмывочной технологии лизиса эритроцитов цельной крови позволяет осуществлять подсчет абсолютного количества клеток с помощью референсных частиц.

Прибор имеет встроенную программу контроля качества QC, позволяющую проводить ежедневный мониторинг корректности настроек прибора и качества используемых реагентов, с построением графиков Леви-Дженингса. Проточный цитометр EPICS 4XL является открытой системой, позволяющей работать с реагентами любых фирм, включая отечественные. В стоимость входит: инсталляция прибора, гарантийное обслуживание в течение 12 месяцев, обучение специалистов заказчика правилам эксплуатации, методам работы на приборе и обработке результатов непосредственно на рабочем месте.

Возможности использования прибора для клинико-диагностических целей:

1) анализ субпопуляций клеток периферической крови (иммуно-фенотипирование, мониторинг ВИЧ-инфицированных);

2) анализ пролиферативного статуса клеток (изучение реакции бласттрансформации, определение активационных маркеров клеток);

3) изучение апоптоза и фагоцитоза;

4) типирование лейкозов;

5) типирование клеток в онкологии, в том числе солидных опухолей с использованием тканеспецифических маркеров;

6) определение количества стволовых (СБ34+) клеток;

7) измерение содержания ДНК и анализ плоидности клеток;

8) анализ клеточного цикла;

9) автоматический подсчет относительного и абсолютного количества клеток с использованием референсных частиц;

10) анализ тромбоцитов;

11) подсчет ретикулоцитов;

12) определение внутриклеточных ферментов, интерлейкинов, Са2+, рН;

13) проведение кинетических измерений.

Техническая спецификация прибора:

1) число определяемых параметров – 6;

2) прямое и боковое светорассеяние (FSC, SSC) четыре параметра флуоресценции (FLI – FLIV).

Режим работы:

1) измерение четырех параметров флуоресценции и двух параметров светорассеяния;

2) подсчет абсолютного и относительного количества частиц в ходе измерения;

3) возможность проведения кинетических измерений.

Оптика:

1) аргоновый лазер (488 нм), 15 mW с воздушным охлаждением;

2) детекторы: два полупроводниковых диода на каналах светорассеяния, четыре фотоумножителя на каналах флуоресценции. Фильтры: нейтральный фильтр 1.0 ОD, фильтры пропускания:

525 нм, 575 нм, 620 нм и 675 нм; все оптические фильтры легкодоступны и могут заменяться пользователем.

Проточная кювета:

1) закрытая кварцевая кювета; программа предусматривает возможность автоматической очистки проточной кюветы без прерывания цикла анализа;

2) разрешение на каналах светорассеяния и флуоресценции: 2 % CV (с использованием флуоресцентных калибровочных частиц для всех каналов).

Обработка сигнала:

1) количество детектируемых сигналов: 2 параметра светорассеяния, 4 параметра флуоресценции;

2) один дополнительный усилитель для дискриминации дублетов;

3) полная компенсация на всех четырех каналах флуоресценции, возможность установки значений компенсации на всех каналах без прерывания цикла анализа;

4) усиление сигнала: линейное усиление сигнала в диапазоне 4 декад с возможностью логарифмического преобразования;

5) полное цифровое преобразование сигналов с помощью микропроцессора;

6) цифровое логарифмическое (4 декады) преобразование с компенсацией сигналов флуоресценции;

7) разрешение сигналов: 1024 канала для всех параметров.

Аппараты для анализа гемостаза (коагулометрия)

Исследовать систему гемостаза можно с помощью разнообразных автоматизированных устройств. К таким устройствам относятся:

1) приборы для исследования функции тромбоцитов (тромбоци-тарные агрегометры);

2) приборы для исследования коагуляционной активности плазмы и крови (коагулометры);

3) приборы для оценки физических свойств плазмы крови при коагуляции.

Каждая группа этих устройств имеет свои технические особенности и занимает определенное место в диагностике состояния системы гемостаза.

Агрегометры

Находящийся в основе практически всех выпускаемых тром-боцитарных агрегометров принцип оценки агрегационной функции тромбоцитов основан на измерении оптической плотности обогащенной тромбоцитами плазмы после добавления в нее того или иного индуктора агрегации. Основу этих приборов составляет измерительная камера, состоящая из источника света и фотоприемника, между которыми помещается оптически прозрачная кювета с исследуемыми тромбоцитами. Изменения оптической плотности плазмы с тромбоцитами после добавления к ней агре-ганта и непрерывного перемешивания с помощью встроенной магнитной мешалки регистрируются самописцем или принтером. В дальнейшем полученная кривая агрегации тромбоцитов оценивается по ряду показателей, рассчитываемых автоматически прибором или ручным способом.

В настоящее время на медицинском рынке отечественных приборов для исследования функции тромбоцитов имеются два оптических тромбоцитарных агрегометра – прибор АР-2110 (фирма «СОЛАР») и анализаторы 2231-А и 2301А (НПФ «Био-ла»).

Прибор АР-2110 относится к классическому оптическому агре-гометру, имеющему в своей основе описанный принцип. Прибор позволяет измерять агрегацию клеток в обогащенной тромбоцитами плазме при использовании любых агрегантов. Прибор может работать с достаточно низким количеством клеток и незначительным объемом исследуемой пробы. Важным достоинством прибора является возможность автоматического расчета основных показателей агрегационной функции тромбоцитов (% максимальной агрегации, время максимальной агрегации, скорость агрегации), которые распечатываются вместе с графиком агрегации. Комплектация прибора, включающая компьютер, позволяет вести базу данных, что дает возможность достаточно оперативного сравнения имеющихся результатов. Одной из заявленных функций прибора является возможность подсчета количества тромбоцитов в измерительной камере, однако надо отметить, что использовать этот показатель необходимо с большой осторожностью в силу несовершенства метода измерения, использованного в приборе для этих целей. Наличие одного измерительного канала позволяет проводить не более 4–5 исследований в час.

Разработанный и выпускаемый НПФ «Биола» анализатор агрегации тромбоцитов принципиально отличается от приборов, основанных на исследовании светопропускания плазмы, обогащенной тромбоцитами. Помимо традиционного турбидиметрического метода в приборе реализован метод исследования агрегации тромбоцитов, основанный на анализе флуктуации светопропускания (ФСП-метод), вызванный случайным изменением числа частиц в оптическом канале. По утверждению авторов прибора, применение такого метода значительно повышает чувствительность прибора, особенно при исследовании спонтанной агрегации тромбоцитов, агрегации при воздействии низких концентраций агрегантов, значительно повышает точность измерения концентрации клеток в измерительной камере. Включенный в комплект компьютер и прилагаемое программное обеспечение дают возможность создания базы данных и расчета необходимых показателей агрегации. Дополнительной функцией прибора является возможность определения активности фактора Виллебранда (при наличии соответствующих реактивов).

Коагулометры

Предлагаемые в настоящее время к использованию в клинической лабораторной практике коагулометры относятся к приборам двух типов: механическому и оптическому, в основе деления лежит механизм, предназначенный для регистрации времени образования сгустка фибрина в тестируемой смеси. По точности и воспроизводимости регистрации времени свертывания в бедной тромбоцитами плазме оптические и механические коагулометры не отличаются друг от друга и значимо превосходят мануальные варианты исследования системы гемостаза. При оптической регистрации образование сгустка фиксируется в ответ на изменение оптических свойств тестируемой смеси. При механическом типе регистрирующее устройство фиксирует изменение скорости перемешивания тестируемой смеси (вследствие изменения вязкости тестируемой смеси) шариком или каким-либо другим устройством для перемешивания. Большинство механических коагулометров – шариковые. Неоспоримым преимуществом механических коагу-лометров является возможность регистрации коагуляции цельной крови, что остается актуальным в педиатрической практике и при скрининговом обследовании. Однако при регистрации времени свертывания в крови ряда больных точность такого исследования несколько ниже, чем при определении времени свертывания в плазме, так как оказывает влияние показатель гематокрита (время свертывания у больного с плеторическим синдромом будет отличаться от времени свертывания у больного с анемией). Весьма удобно, что почти на всех коагулометрах с оптическим типом регистрации старт времени коагуляции происходит автоматически в ответ на изменение оптической плотности после добавления стартового реагента (например, стартовым реагентом в тест-системе АПТВ является хлорид кальция, т. е. последний, добавляемый в тестируемую смесь реагент).

К совмещенным устройствам следует отнести редкие экземпляры коагулометров, в которых предусмотрена возможность выбора оптического или механического типа регистрации (т. е. в одном приборе совмещены оптический и механический принципы регистрации). К совмещенным следует отнести отечественный Ми-нилаб-701.

Различают одноканальные, двухканальные, четырехканаль-ные и многоканальные коагулометры. Как правило, число каналов не бывает более десяти. Производительность одноканального коагулометра низка. Опытный лаборант, используя мануальную технику, выполнит большинство коагуляционных тестов в 2–3 раза быстрее, чем на одноканальном коагулометре. У коагуло-метров, имеющих более двух регистрирующих каналов, число каналов, как правило, кратное, так как большинство производителей предусматривают возможность дублирующих определений и вычисление коэффициента вариации между двумя каналами.

Число каналов автоматического коагулометра для его производительности не имеет существенного значения, поскольку производительность автоматического коагулометра, как правило, выше многоканальных.

В представленной таблице показано оптимальное число регистрирующих каналов коагулометра без автоматических функций в зависимости от числа коагуляционных тестов, выполняемых в течение рабочего дня в клинико-диагностической лаборатории (см. табл. 4).

Таблица 4 Виды коагуляторов

Некоторые коагулометры совмещены с фотометрами для выполнения амидолитических и/или иммунологических тестов. Такие коагулометры называют комбинированными. Большинство же коагулометров не способны выполнять амидолитические и/или иммунологические тесты.

Автоматическим коагулометром следует называть коагуло-метр с высокой производительностью, в котором предусмотрена программа, полностью контролирующая добавление реагентов (и позволяющая изменять объемы дозируемых реагентов), а также автоматическую подачу образцов плазмы для исследования, наличие программируемого алгоритма, позволяющего выполнять разные тесты для разных образцов плазмы, автоматическую регистрацию и запоминание результатов исследования, с возможностью последующей обработки этих результатов.

Полуавтоматическими следует называть коагулометры, имеющие программируемый модуль, позволяющий автоматически добавлять реагенты в кювету для регистрации коагуляции (но не позволяющий добавлять исследуемую плазму в кювету). Кроме того, такие коагулометры имеют автоматическую регистрацию и запоминание результатов исследования, с возможностью обработки результатов.

Коагулометры без автоматических функций с программируемым модулем вычислений – это наиболее распространенный вариант. Такой коагулометр имеет программируемый модуль для выполнения вычислений и возможность хранения в памяти коагу-лометра калибровочных кривых (что весьма значимо для определения уровня фибриногена).

Коагулятором следует назвать примитивный коагулометр, позволяющий определить только время свертывания. Коагулятор не имеет программируемого модуля для выполнения вычислений, поэтому не предусмотрена возможность хранения какой-либо информации, в том числе нет возможности хранения калибровочных кривых, нет модуля распечатки результатов, нет возможности какого-либо расчета, поэтому коагуляторы способны представить результаты исследования только в секундах, например, показатель протромбинового времени не может быть представлен в показателе международного нормализованного отношения (МНО или INR), т. е. эти показатели можно будет определить или на калькуляторе, или используя специальные таблицы. Используя коагулятор, концентрацию фибриногена хронометрическим методом Клауса придется определить по калибровочной кривой, построенной вручную на калибровочном графике, т. е. такие приборы не предусматривают возможность автоматического представления результатов исследования в граммах/литрах (или в каких-либо других единицах измерения). Коагуляторы, как правило, однока-нальные.

Разработка прибора, основанного на оценке движения стального шарика в свертывающейся пробе плазмы или крови, была начата в начале 1990-х годов сотрудниками ООО «НПО „Медио-Лаб“ и привела к созданию отечественного механического коагу-лометра ЭМКО-02. Серия этих приборов была выпущена и поступила в различные клинико-диагностические лаборатории страны, однако некоторые технические особенности прибора не позволяли проводить точные измерения в пробах с низким содержанием фибриногена. В настоящее время прибор не производится, хотя какое-то количество приборов еще эксплуатируется в некоторых клинико-диагностических лабораториях.

Оптический коагулометр был создан и успешно выпускается в настоящее время сотрудниками ООО «НПО „Астра“ (г. Уфа) при участии ООО „НПО «МедиоЛаб“. Это одноканальный оптико-механический коагулометр АСКО-02. Большими достоинствами прибора безусловно являются его высокая надежность и точность измерений, крайняя простота эксплуатации и весьма низкая стоимость, что позволяет говорить о нем как о базовом приборе в своем классе. В работе с прибором возможно использовать любые как отечественные, так и импортные реактивы. Вместе с тем надо отметить, что использование этого прибора целесообразно при достаточно небольшом объеме исследований.

Большой объем исследований системы гемостаза в клинико-диагностических лабораториях средних и крупных лечебно-профилактических учреждений может быть своевременно выполнен только при использовании многоканальных полуавтоматических или автоматических систем. Разработка прибора, способного решить эту задачу, была предпринята в последние годы сотрудниками ООО «ВАСМА» (г. Москва) при участии ООО «НПО „Медио-Лаб“.

В настоящее время новый оптический восьмиканальный программируемый коагулометр АСКО-08 со встроенным принтером прошел все испытания, зарегистрирован в Министерстве здравоохранения и выпускается серийно.

Принцип работы прибора основан на турбидиметрии коагулируемого образца плазмы при его непрерывном перемешивании магнитной мешалкой. Используемый в приборе принцип измерения значительно повышает его чувствительность и позволяет работать с образцами плазм с низким содержанием фибриногена, что весьма важно при исследовании у тяжелых больных. Помимо этого, конструктивные особенности измерительной части прибора позволяют использовать уменьшенные (по отношению к стандартным) количества реактивов и исследуемой плазмы, что безусловно важно в клинической и прежде всего педиатрической практике.

Сохранение в долговременной памяти прибора калибровочных значений для таких методов, как определение протромбинового времени, фибриногена, факторов свертывания крови, антитромбина III и др., позволяет получать расчетные значения автоматически после проведения измерения. Встроенный в прибор принтер позволяет получать неограниченное количество бланков результатов исследований.

Приборы для исследования физических свойств плазмы/крови при коагуляции

Понимание состояния реологических свойств крови является важным компонентом оценки микроциркуляции пациента и непростой задачей для врача, даже в современных условиях. Одним из наиболее важных и широко применяемых методов оценки считается измерение вязкости цельной крови методом ротационной вискозиметрии, позволяющей получить кривую вязкости крови применительно практически ко всем участкам сосудистого русла. Наиболее широко для этих целей применяются ротационные вискозиметры, создающие скорости сдвига в диапазонах от менее 1 обратной секунды до тысяч обратных секунд, перекрывая таким образом весь профиль скоростей движения крови в сосудистом русле. В настоящее время для исследований крови человека наибольшее распространение получили зарубежные ротационные вискозиметры фирм «НАЛКЕ» (Голландия) и «СопггауеБ» (Швейцария). Эти приборы представляют собой классические ротационные вискозиметры с различными измерительными системами, такими как цилиндр-цилиндр, пластина-пластина, конус-пластина и др. Приборы этих фирм отличает высокая технология, помогающая измерять вязкостные характеристики маленького объема образца крови в очень широком диапазоне скоростей сдвига. Имеющиеся дополнительные возможности позволяют оценить и вязко-пластические свойства биологических образцов, например, таких как синовиальная жидкость.

Однако высокие пользовательские характеристики этих приборов сопровождаются весьма высокой стоимостью (40–50 тысяч долларов США), что практически делает их недоступными для использования в нашей стране. Из отечественных приборов ротационные вискозиметры до недавнего времени были представлены двумя ротационными вискозиметрами: наиболее широко применяемым в отечественной практике – АКР-2 и прибором, получившим меньшую распространенность, но имеющим более широкие возможности, – ВИР-78.

Наиболее широко представленный в отечественных лабораториях прибор АКР-2 имеет в своей основе принцип «свободно плавающего ротора» и позволяет измерять вязкость 0,5 мл образца в диапазоне скоростей сдвига 10-1000 обратных секунд, что вполне удовлетворяет имеющимся клиническим задачам. Используя этот прибор, врач получает возможность динамически контролировать изменения цельной крови и плазмы пациента. Наряду с этими показателями, используя специальные методики, возможно рассчитать такие показатели, как агрегация и деформируемость эритроцитов.

Необходимо отметить, что несмотря на распространенность, показатели вязкости цельной крови, даже измеренные с помощью ротационной вискозиметрии, представляют собой интегральную величину, определяемую:

1) концентрацией эритроцитов (гематокритом);

2) вязкостью плазмы;

3) агрегацией эритроцитов;

4) деформируемостью эритроцитов.

Понятно, что максимальный клинический интерес могут представлять два последних показателя реологического поведения крови. К настоящему времени в отечественной лабораторной и научной практике наибольшее распространение получили методы расчета этих показателей на основании измеренных величин вязкости цельной крови при различных скоростях сдвига. Эти показатели представляют собой определенные коэффициенты агрегации и деформируемости эритроцитов и могут служить для оценки микрореологических свойств крови с определенной степенью точности.

Исследования вязкости цельной крови и основанные на ней расчеты в настоящее время затруднительны, поскольку импортные приборы крайне дороги, а выпуск отечественных приборов прекращен. В связи с этим значительный интерес представляют возможности прямых исследований микрореологических свойств крови.

На сегодняшний день имеются приборы, позволяющие достаточно точно и специфично измерять агрегацию и деформируемость эритроцитов. Один из этих приборов – анализатор агрегации эритроцитов МА-1 (Германия). С его помощью измеряют агрегацию эритроцитов из минимального обьема крови в течение 2–3 мин. Исследования этим прибором основаны на принципе, предложенном Smidt-Shonbein,позволяющем измерять светопро-пускание образца цельной крови в оптически прозрачной кювете вискозиметра, что дает возможность проводить эти исследования при различных скоростях сдвига. Среди различных лабораторных методов оценки агрегации эритроцитов данный метод в настоящее время является наиболее удобным и адекватным. Для целей исследования деформируемости эритроцитов предложено достаточно много методов. Наибольшее распространение среди них получили методы, основанные на фильтруемости образца крови с использованием фильтров различного происхождения и величин пор, и оптические методы, основанные на оценке изменения дифракции света при прохождении его через взвесь полностью дезагрегированных эритроцитов, подвергнутых высокому напряжению сдвига, что приводит их к той или иной степени деформации.

Получившие определенное распространение методы, основанные на фильтруемости взвеси эритроцитов, оказались зависимыми от различных условий и влияния других клеток крови.

Оптический способ оценки агрегации эритроцитов продолжал развиваться и в настоящее время реализован в приборе Rheodyn SSD (Германия), который позволяет проводить эти исследования в условиях любой лаборатории из небольшого объема крови и в течение короткого времени.

Аппараты для биохимического анализа глюкозы и лактата

Среди всех биохимических тестов определение концентрации глюкозы в крови занимает особое место, поскольку определение гликемии является самым частым и, вероятно, одним из самых ответственных исследований, учитывая цену неправильного измерения.

Однако, интерпретируя результат лабораторного исследования гликемии, нужно учитывать высокую лабильность параметра, особенно у больных с нарушенной регуляцией этого гомеостатиче-ского параметра при наличии сахарного диабета. Прием пищи, физические нагрузки, прием сахароснижающих препаратов, наконец, инъекции инсулина, существенно изменяя концентрацию глюкозы, обусловливают необходимость постоянного контроля уровня гликемии. В повседневной жизни пациенты с сахарным диабетом выполняют этот тест в домашних условиях, поскольку без этой информации им трудно скорректировать свою диету, дозу инсулина или пероральных сахароснижающих препаратов.

В современных клинико-диагностических лабораториях наиболее широко применяются энзиматические методы, основанные на использовании фермента – глюкозооксидазы. Применение глюкозооксидазной реакции трансформирует задачу определения концентрации глюкозы в задачу определения концентрации перекиси водорода, которая, как показало время, значительно проще первой. Для этого широко используются фотометрическая или электрохимическая технологии. Фотометрический биохимический метод отличается высокой специфичностью и простотой выполнения. Суть метода состоит в том, что молекулы перекиси водорода под действием фермента пероксидазы расщепляются с образованием активной формы кислорода – отрицательного иона молекулы кислорода – который в свою очередь окисляет хромоген, что приводит к значительному изменению спектра поглощения хромогена. Глюкозооксидазный фотометрический метод признан сегодня одним из самых точных количественных методов определения глюкозы как в сыворотке (плазме), так и в цельной крови. При работе с цельной капиллярной кровью следует учитывать, что результат будет зависеть от гематокрита крови, влияя на точность определяемого параметра. Метод можно реализовать как с применением обычного фотометра, так и в биохимических автоанализаторах, прежде всего для выполнения достаточно больших объемов исследований с использованием сыворотки крови пациентов.

Наряду с методом фотометрирования по конечной точке получают распространение приборы, в которых реализован кинетический метод фотометрирования. Суть метода заключается в следующем: при определенном соотношении активностей глю-козооксидазы и пероксидазы скорость образования окрашенного соединения будет некоторое время после внесения пробы в рабочий раствор пропорциональна концентрации глюкозы в пробе. Преимущество такого метода состоит в том, что результат не зависит от наличия в пробе поглощения от других соединений, поскольку это поглощение стабильно во времени.

Методы «сухой химии» сочетают в себе аналитическую точность количественного ферментативного метода со скоростью и простотой процедуры определения гликемии.

Измерение концентрации глюкозы из цельной крови с помощью приборов, работа которых основана на электрохимическом, в частности амперометрическом, принципе измерения, предполагает применение специальных ферментных датчиков. Перекись водорода является крайне нестабильным химическим соединением, и она служит источником заряженных частиц. Именно это и используется на ферментных датчиках мембранного типа или электрохимических элементах портативных глюкометров.

В измерительной ячейке стационарных приборов, сконструированной как проточная, находится измерительная камера, с одной стороны ограниченная ферментной мембраной. На мембрану специальным образом сорбирована глюкозооксидаза. С другой стороны мембраны к ней прижимается платиновый электрод. Проба цельной крови разводится в системном буферном растворе (эритроциты разрушаются), после чего подается в проточную ячейку. Глюкоза подвергается окислению под воздействием фермента глюкозооксидазы, находящейся на мембране. Образовавшаяся перекись водорода диффундирует через мембрану и окисляется далее в каталитической реакции под действием платины. Таким образом, диффузия перекиси водорода на поверхность платины приводит к появлению электрического тока, пропорционального числу молекул Н ₂О ₂, образующихся в единицу времени из молекул глюкозы. Электрический ток усиливается и измеряется аналого-цифровым преобразователем прибора. Это измеренное значение пропорционально концентрации глюкозы в пробе.

Существует и другая модификация амперометрического метода измерения концентрации глюкозы в крови. Окисление глюкозы под действием фермента глюкозооксидазы сопровождается образованием восстановленной формы молекул ферроцианида калия, которые при контакте с электродом окисляются, отдавая один электрон. Таким образом, в результате окисления одной молекулы глюкозы на измерительный электрод попадает один электрон. Возникающий в результате химических реакций электрический ток пропорционален концентрации глюкозы. Электрический ток измеряется специальным электронным устройством и пере-считывается в величину концентрации глюкозы. Данная система состоит из измерительного прибора и тест-полоски. Последняя имеет микроячейку, содержащую комплекс реагентов и измерительные электроды. Реагенты содержатся в мембране тест-полоски, которая напоминает губку с микроскопическими порами и выполняет несколько функций: она действует как резервуар, собирая необходимое количество крови, и как фильтр, блокирующий форменные элементы (эритроциты, лейкоциты и др.). При попадании крови в ячейку возникает электрический контакт и прибор начинает измерение.

Для того чтобы результат измерения получался в виде концентрации глюкозы, необходимо знать связь между величиной электрического тока и концентрацией глюкозы. Эта связь зависит от конструкции измерительной ячейки, а также от концентрации реагентов и активности фермента, содержащихся в ячейке. В практике клинической лабораторной диагностики приняты два способа выражения концентрации глюкозы в крови: содержание глюкозы в единице объема цельной крови и содержание глюкозы в единице объема сыворотки (плазмы) крови. Эти две величины различаются примерно на 12 %, и степень отличия для каждой пробы крови зависит от величины гематокрита. Поскольку сегодня в большинстве биохимических лабораторий концентрация глюкозы определяется в сыворотке крови, то и при определении концентрации глюкозы с применением портативных приборов желательно, чтобы результат измерения выражался в этих же величинах. Это упрощает сопоставление результатов анализов, сделанных в лаборатории и с помощью портативных глюкометров.

Аппараты для иммуноферментного анализа (ИФА)

Любое вещество, обладающее свойствами антигена, полноценного или неполноценного (гаптена), можно количественно определить с применением иммуноферментного анализа (ИФА). Для проведения ИФА необходимо иметь очищенный антиген, специфическое для этого антигена антитело, фермент в качестве метки для антигена или антитела и средство (устройство) для регистрации активности фермента.

Реакцию ИФА можно проводить двояко. В первом случае из антигена, находящегося в тестируемом образце, и меченого антитела, добавленного в концентрации, превышающей концентрацию антигена, образуется комплекс антиген-меченое антитело. Количественно проанализировать такую реакцию можно по образованию комплекса антиген-меченое антитело, определяемого с помощью ферментной метки, или по меченому антителу, оставшемуся в несвязанном состоянии. Это неконкурентный вариант ИФА.

Во втором варианте лимитирующим субстратом является антитело. Меченый антиген при добавлении в анализируемый образец в известной концентрации связывается с антителом, образуя комплекс меченый антиген-антитело. В этой реакции меченый антиген будет конкурировать с немеченым антигеном, содержащимся в образце. Концентрация меченый антиген-антитело будет обратно пропорциональна концентрации антигена. Таким образом по заранее известной концентрации меченого антигена можно определить неизвестную концентрацию антигена. Это конкурентный вариант ИФА. В обоих вариантах ИФА надо решить важную задачу – отделить связанную фракцию меченого реагента от несвя-завшегося, свободного реагента, чтобы определить долю специфического связывания.

Наборы иммунохимических реагентов для определения антигенов называются диагностикумами. Для их создания необходимо решить задачи получения антигена, антитела, комплекса антигена или антитела с ферментом, наладить регистрацию иммунохимиче-ской реакции по активности фермента, использованного в качестве метки. Кроме ферментов, в качестве меток для антигенов используют радиоактивные и флуоресцирующие соединения, такие реакции соответственно называются радиоиммунным и флуорес-центноиммунным анализом (РИА и ФИА). Предпочтением пользуется ИФА, поскольку он не требует сложной измерительной аппаратуры и применения радиоактивных соединений.