Текст книги "Биохимия старения"
Автор книги: Роберт Сапольски
сообщить о нарушении
Текущая страница: 8 (всего у книги 19 страниц)
В приведенных исследованиях было показано также, что индукция одного и того же фермента по-разному меняется в разных органах. Например, индукция пируваткиназы в сердце старой крысы выше, чем у животного в среднем возрасте, в то время как в мозгу старой крысы она ниже по сравнению с животным в среднем возрасте [21–23].
Индукция многих ферментов в старческом возрасте уменьшается, и поэтому ослабевает адаптивность организма или его способность к ответу на соответствующий стимул. Эти ответы на основании времени, затрачиваемого на индукцию, и величины индукции (рис. 3.7) подразделяют на четыре главных типа [5]. У типа 1 лаг-период индукции в старости больше, но ее величина не меняется, если индуктор применяется в течение достаточного времени. Примерами этого типа ферментов являются глюкокиназа [1] (рис. 3.8), ДНК-полимераза [3] (рис. 3.9), тирозинаминотрансфераза [2] и сериндегидратаза [88] печени крыс при ответе на действие глюкозы, АКТГ и кортизона соответственно [5]. Лаг-период индукции тирозинаминотрансферазы после выдерживания при низкой температуре у старой мыши также увеличен [33].
Рис. 3.7. Зависимость ферментной адаптации от возраста [15]. В общем виде показаны четыре основных типа влияния старения на время протекания и величину гипотетических адаптивных изменений активности ферментов.
Сплошная линия – молодые животные, штриховая – среднего возраста, пунктирная – старые
Рис. 3.8. Зависимость лаг-периода индукции глюкокиназы от возраста крысы [4]
Рис. 3.9. Возрастные различия начала и максимума скорости синтеза ДНК в подчелюстной железе крысы после инъекции изопротеренола [3].
1 – возраст 2 мес; 2 – возраст 12 мес
У ферментов типа 2 степень индукции при одинаковой дозе индуктора в старческом возрасте или больше, или меньше. Индукция орнитин-оксокислота – аминотрансферазы кортизоном, глюкозо-6-фосфатазы в печени высокобелковым рационом [88], цитоплазматической малатдегидрогеназы адреналэктомированных крыс кортизоном [53] и орнитиндекарбоксилазы дексаметазоном [30] в старости значительно понижается. Экстремальные случаи такого понижения наблюдаются для митохондриальной малатдегидрогеназы [53] и аргиназы [90] печени после удаления надпочечника и введения кортизона и для ацетилхолинэстеразы мозга крысы [81] после овариэктомии и введения эстрадиола. Во всех этих случаях у старых животных наблюдается полное отсутствие индукции. Вместе с тем индукция глутаминсинтетазы кортизоном у старых крыс больше и в норме, и после удаления надпочечника [89]. Индукция в этих случаях исследовалась только одномоментно, и лаг-период ни для старых крыс, ни для крыс в среднем возрасте неизвестен.
У ферментов типа 3 в старости происходят изменения и величины индукции, и времени, необходимого для индукции. К этому типу относятся замедленное и более слабое повышение активности тимидинкиназы и дезокситимидилатсинтетазы из слюнных желез у крысы после введения изопротеринола [96] или у дрозофилы после обработки аминотриазолом [82].
Для ферментов типа 4 ответ на действие индуктора в среднем возрасте и в старости одинаков. К этому типу относится индукция глюкокиназы, тирозинаминотрансферазы [6] и митохондриальной глицерол-3-фосфат – дегидрогеназы [17] инсулином, кортизоном и тироксином соответственно.
Как и в случае содержания ферментов у нормальных животных, способность различных ферментов к индукции разными индукторами зависит, по-видимому, от линии и пола животных, времени измерения активности фермента, условий, в которых содержались животные, и их физиологического состояния. Однако очевидно, что в одной и той же популяции индукция некоторых ферментов может меняться. При этом может происходить изменение или величины, или лаг-периода, или того и другого вместе. Последовательность событий, начинающаяся с момента проникновения стероидного гормона в клетку-мишень и завершающаяся синтезом специфического белка, более или менее установлена. Гормон проникает в клетку-мишень и связывается со специфическим белковым рецептором в цитозоле, образуя комплекс гормон – рецептор (Г-Р). Этот комплекс проникает в ядро, где связывается со специфическими акцепторными центрами хроматина и стимулирует транскрипцию, после чего происходит синтез специфического белка (рис. 5.2). Необходимо точно определить то место (места) в этой последовательности событий, на котором в старческом возрасте происходит нарушение индукции стероидными гормонами.
Такая попытка была предпринята Канунго и его сотрудниками [54], которые показали, что эстрадиол накапливается в мозгу крысы. Введение эстрадиола (10 мкг/100 г) индуцирует ацетилхолинэстеразу в полушариях головного мозга незрелых и зрелых крыс после овариэктомии, но не влияет на синтез этого фермента у старых крыс [81]. Одной из возможных причин ухудшения индукции ацетилхолинэстеразы эстрадиолом в мозгу старой крысы может быть понижение содержания эстрадиол-связывающих рецепторных белков. Чтобы проверить это предположение, гомогенаты, полученные из полушария головного мозга 7-, 44– и 108-недельных крыс с удаленными яичниками, инкубировали с 3Н-эстрадиолом и количественно определяли эстрадиол-специфичный белок. Оказалось, что самое большое сродство этого белка к 17β-эстрадиолу характерно для головного мозга незрелых крыс, у которых наблюдается и самая сильная индукция ацетилхолинэстеразы (рис. 5.6) [56]. Сродство белка к эстрадиолу с возрастом понижается. Следовательно, одной из молекулярных причин ухудшения индукции ацетилхолинэстеразы эстрадиолом, по-видимому, является уменьшение содержания эстрадиол-специфического белка. Возникает вопрос: чем же вызывается это уменьшение? Известно, что эстрадиол стимулирует синтез своего собственного рецептора. Является ли понижение содержания специфического рецептора эстрадиола в мозгу крыс-самок следствием понижения содержания эстрадиола, которое, как известно, происходит в старости? У крыс-самцов уровень андрогена в старости также снижается. Влияет ли это на содержание ацетилхолинэстеразы в полушариях головного мозга? Если такое влияние существует, то для повышения содержания ацетилхолинэстеразы, жизненно важной для мозга, старым животным можно вводить стероидные гормоны.
Попытки повысить уровень определенных ферментов в мозгу старых крыс путем введения стероидных гормонов дали обнадеживающие результаты. Кастрация старых мужских и женских особей крыс понижает содержание в полушариях мозга двух жизненно важных ферментов, ответственных за проводимость нервов, – ацетилхолинэстеразы и холин-ацетилтрансферазы. Ацетилхолинэстераза катализирует гидролиз ацетилхолина, а холин-ацетилтрансфераза – его синтез. Введение 10 мкг тестостерона на 100 г веса повышает содержание того и другого фермента у старых крыс обоих полов приблизительно до уровня репродуктивного периода. В отношении индукции холин-ацетилтрансферазы тестостерон более эффективен, чем эстрадиол (рис. 5.9) [50]. Такие же результаты были получены для пируваткиназы мозга и сердца (рис. 5.8) [22, 23]. Поскольку в клетке есть ферменты, переводящие тестостерон в эстрадиол, неясно, происходит ли индукция благодаря тестостерону или эстрадиолу. Однако полученные результаты указывают путь управления уровнем специфических ферментов с помощью введения соответствующих количеств их индукторов.
Другим методом, который попытались применить для восстановления индукции ферментов у старых животных, был метод стимулирования регенерации ткани. Было показано, что активность митохондриальной малатдегидрогеназы понижается в печени молодых крыс после удаления надпочечника, но не меняется при этой же операции у старых животных [53]. Введение кортизона вызывает индукцию фермента у молодых крыс и не вызывает у старых. Однако если у старых крыс провести частичную гепатэктомию, дать печени возможность регенерировать в течение трех дней и затем ввести кортизон, то количество фермента увеличится. Таким образом, в отношении индукции митохондриальной малатдегидрогеназы регенерирующая печень старых крыс функционирует так же, как печень молодых. По-видимому, это нарушение индукции, связанное со старением, может быть ликвидировано. Наиболее значительным результатом этой работы является вывод о том, что молекулярные изменения, которые происходят в организме в процессе старения животного, могут быть обращены вспять. Однако клетки печени делятся на протяжении всей жизни, так как эти клетки являются премитотическими. Поэтому печень и способна к регенерации. Многие другие органы, такие, как мозг, сердце, скелетные мышцы, не могут регенерировать, так как их клетки теряют способность делиться на очень ранней стадии развития и становятся постмитотическими. Обратимы ли изменения, происходящие в старческом возрасте в этих органах?
В связи с упомянутыми исследованиями возникает еще один вопрос – обусловлено ли нарушение индукции малатдегидрогеназы в печени старых крыс уменьшением содержания специфических рецепторов кортизона или оно обусловлено репрессией гена малатдегидрогеназы? Поскольку активность малатдегидрогеназы в печени нормальных старых крыс высокая, появление репрессора в старческом возрасте, по-видимому, маловероятно. Чтобы ответить на поставленные вопросы, очевидно, важно измерить количество кортизон-специфического рецептора в печени старых крыс.
Описанные выше исследования показывают, что такие факторы, как гормоны и их рецепторы, важны для поддержания уровня и адаптивного ответа ферментов в различных возрастах. Изменения содержания этих факторов в старости могут вызывать изменения в транскрипции и трансляции и, таким образом, влиять на содержание ферментов. Это может в свою очередь приводить к функциональным сдвигам в органах и в организме в целом.
Молекулярные свойства ферментов
Измерения Км, Ki, молекулярной массы, электрофоретической подвижности, антигенности и тепловой инактивации ферментов дают ценную информацию об их молекулярных свойствах. При исследовании ферментов, выделенных из органов молодых и старых животных, подобные измерения полезны при решении вопроса о том, одинакова ли структура ферментов, синтезированных в старых и молодых организмах. Если структурные различия не наблюдаются, то, по-видимому, в течение всей жизни фермент кодируется одним и тем же геном, не претерпевающим структурных изменений. Если же различия есть, то это означает, что на различных стадиях жизни функционируют разные гены или же происходят изменения в нуклеотидах, вызывающие изменения кодонов. Вместе с тем такие ошибки в строении молекул белка, как замена аминокислот, могут вноситься в ходе синтеза белка. Для соответствующих исследований требуются в высокой степени очищенные ферменты. Трудность этих исследований заключается в том, что если изучаемый фермент имеет изоферменты и доминирующей формой в одном возрасте является один изофермент, а в другом – другой, то кинетические параметры фермента могут быть различны. Поэтому прежде всего нужно установить, имеет ли изучаемый фермент изоферменты. Если суметь преодолеть трудности, в подобных исследованиях можно получить полезную информацию.
Как функции возраста были измерены кинетические параметры только небольшого числа ферментов на неполностью очищенных препаратах. Это ацетилхолинэстераза [81] и пируваткиназа [22] мозга; миозиновая АТРаза [51, 105] и альдолаза скелетных мышц [38]; пероксид-дисмутаза [93], цитоплазматическая аланинаминотрансфераза [87] и альдолаза [39] печени млекопитающих.
В табл. 3.5 приведены различные кинетические параметры ферментов, выделенных из органов молодых и старых крыс. В целом видно, что существенной разницы в Км, Ki, молекулярной массе и электрофоретической подвижности нет. Однако удельная активность альдолазы [39] и пероксид-дисмутазы [93] старых крыс составляет только 30–70 % активности этих ферментов у крыс среднего возраста. Ферменты старых крыс, кроме того, более термолабильны. Эти различия были объяснены посттрансляционными модификациями [37].
Таблица 3.5. Сравнение кинетических свойств очищенных ферментов, полученных в молодом и старом возрасте
Поскольку были изучены молекулярные свойства только нескольких ферментов, определенных заключений сделать пока нельзя. Однако данные по тем ферментам, кинетические параметры которых известны, показывают, что в организмах молодых и старых животных синтезируются одни и те же молекулы. Следовательно, гены, ответственные за их синтез в разных возрастах, по-видимому, одни и те же. Небольшие различия, наблюдаемые в случаях аланинаминотрансферазы молодых и старых крыс, могут быть связаны со сменой форм изофермента, как это показано Патнайком и Канунго [87]. Различия в удельной активности и термолабильности пероксид-дисмутазы и альдолазы были отнесены к посттрансляционным модификациям [37] (гл. 9).
Была выдвинута и альтернативная точка зрения, заключающаяся в том, что старение происходит в результате прогрессивного нарастания с течением времени числа ошибок в молекулах белка. Эта точка зрения основана на том, что с возрастом постепенно увеличивается неактивная фракция молекул фермента [47, 48, 84] (гл. 9). С ней трудно согласовать понижение в старости удельной активности пероксид-дисмутазы, с одной стороны, и повышение удельной активности миозиновой АТРазы – с другой. В последнем случае Км и Vmax в старости повышаются, что может происходить благодаря конформационным изменениям, индуцированным эффектором. Ряд авторов считает [44, 93], что некоторые изменения кинетических параметров пероксид-дисмутазы и фосфоглицераткиназы нельзя объяснить ошибками в синтезе; скорее всего, они возникают из-за посттрансляционных модификаций – таких, как фосфорилирование, метилирование, ацетилирование и т. д. Было бы интересно выяснить, каким образом в старости происходят такие посттрансляционные модификации (детальное обсуждение этого вопроса приведено в гл. 9).
Резюме
Как функции возраста животных были изучены различные аспекты функционирования ферментов – их активность, формы изоферментов, индукция, кинетические параметры. Активность некоторых ферментов, выраженная в Ед.·мг-1 белка и в Ед.·мг-1 ДНК, в старости понижается, в то время как других – повышается. Для некоторых ферментов никаких изменений не обнаруживается. Не выявлено никаких специфических закономерностей в изменениях ферментов отдельных классов, одного и того же органа или клеточной органеллы. Поскольку каждый метаболический путь включает в себя ферменты, относящиеся к различным классам, особую ценность имеют исследования всех ферментов данного пути в одинаковых условиях.
Изучение изменения набора изоферментов дало полезную информацию о типах изменений, которые происходят на уровне генома и ответственны не только за смену изоферментов, но также и за активность ферментов. Смена изоферментов может нарушить точный и тонкий контроль метаболических путей из-за различий изоферментов в сродстве к субстратам и эффекторам. Это может вызывать значительные изменения в активности метаболических процессов и приводить к функциональным изменениям всего организма. Сдвиг к Н4-ЛДГ в мозгу, сердце и скелетных мышцах крысы в старости может сделать эти ткани более аэробными. Сдвиг к цААТ-В в печени крысы в старости таким же образом может вызвать изменение в метаболизме аминокислот. Повышение относительного содержания некоторых изоферментов свидетельствует о повышении активности соответствующих генов. Такие изменения в функции гена в старости могут быть вызваны появлением или исчезновением в этом возрасте ряда факторов или эффекторов.
Изучение индукции ферментов, особенно стероидными гормонами, показывает, что в целом в старости степень индукции снижается. В некоторых случаях удается повернуть вспять это понижение путем введения необходимого количества гормонов. Вероятно, снижение индукции ацетилхолинэстеразы эстрадиолом в старости происходит благодаря уменьшению уровня эстрадиолспецифического рецептора. В некоторых тканях, таких, как печень, возможно восстановление индукции путем стимулирования регенерации ткани. Исследования в этой области показывают, что изменения в старости активности ферментов и форм их изоферментов обратимы, и, по-видимому, возможно их возвращение к уровням, свойственным среднему возрасту.
При изучении кинетических и молекулярных свойств нескольких ферментов было обнаружено, что ряд свойств: Км, Ki, молекулярная масса и электрофоретическая подвижность – у старых и молодых животных одинаковы. Однако удельная активность нескольких изученных к настоящему моменту ферментов в старости снижается, а их термочувствительность возрастает. Это может объясняться посттрансляционными модификациями. Следовательно, за синтез фермента на протяжении всей жизни отвечает один и тот же ген. Эти исследования, а также изучение изоферментов и индукции свидетельствуют в пользу той точки зрения, согласно которой изменения в содержании ферментов, наблюдаемые в старости, происходят благодаря регуляции активности соответствующих генов, которые, по-видимому, стимулируются факторами, появляющимися или исчезающими по окончании репродуктивного периода. Подобные изменения могут вызывать вырождение функций или понижение способности организма адаптироваться к эндогенным и экзогенным факторам.
Литература
1. Adelman R. C. J. biol. Chem., 245, 1032–1035 (1970).
2. Adelman R. C. Nature, 228, 1095–1096 (1970).
3. Adelman R. C. Expl. Gerontol., 6, 75–87 (1971).
4. Adelman R. C. Adv. Gerontol. Res., 4, 1-23 (1972).
5. Adelman R. C. In: Enzyme Induction (D. V. Parke, Ed.), 303–311, Plenum Press, New York (1975).
6. Baker G. T., III. Expl. Gerontol., 10, 231–237 (1975).
7. Barrows C. H., Roeder L. M. J. Gerontol., 16, 321–325 (1961).
8. Barrows C. H., Falzone J. A., Shock N. W. J. Gerontol., 15, 130–133 (1960).
9. Barrows C. H., Roeder L. M., Falzone J. A. J. Gerontol., 17, 144–147 (1962).
10. Beauchene R. W., Fanestil D. D., Barrows C. H. J. Gerontol, 20, 306–310 (1965).
11. Beauchene R. W., Roeder L. M., Barrows C. H. J. Gerontol., 22, 318 (1967).
12. Beckendorf G. W., Stephen W. P. Biochim. Biophys. Acta, 201, 101–108 (1970).
13. Beezeley A. E., McCarthy J. L., Sohal R. S. Expl. Gerontol., 9, 71–74 (1974).
14. Bolla R., Brot N. Arch. Biochem. Biophys., 169, 227–236 (1975).
15. Brun A., Hultberg B. Mech. Age. Dev., 4, 201–213 (1975).
16. Bulos B., Sacktor B., Grossman I. W., Alt man N. J. Gerontol 26, 13 (1971).
17. Bulos B., Shukla S., Sacktor B. Mech. Age. Dev., 1, 227–232 (1972).
18. Bulos b., Shukla S., Sacktor B. Arch. Biochem. Biophys., 166, 639–644 (1975).
19. Cahn R. D., Kaplan N. O., LeVine L., Zwilling E. Science, 136, 962–969 (1962).
20. Chainy G. B. N. Metabolic changes during ageing, Ph. D. Thesis, Banaras Hindu University (1977).
21. Chainy G. B. N., Kanungo M. S. Biochem. Biophys. Res. Commun 72, 777–781 (1976).
22. Chainy G. B. N., Kanungo M. S. J. Neurochem., 30, 419–427 (1978).
23. Chainy G. B. N., Kanungo M. S. Biochim. Biophys. Acta, 540, 65–72 (1978).
24. Chen S. H., Gibleit E. R. Science, 173, 148–149 (1971).
25. Cheskey J. F. Expl. Gerontol, 10, 165–169 (1975).
26. Dawson D. M., Goodfriend T. L., Kaplan N. O. Science, 143, 929–933 (1964).
27. Dunn G. R., Wilson T. G., Jacobson K. B. J. exp. Zool., 171, 185–190 (1969).
28. Eppenberger H. M., Eppenberger M., Richterich R., Aelei H. Devi. Biol., 10, 1-16 (1964).
29. Erlanger M., Gershon D. Expl. Gerontol., 10, 231–237 (1970).
30. Ferioli M. E., Ceruti G., Comolli R. Exptl. Gerontol., 11, 153–156 (1976).
31. Filler R., Criss W. E. Biochem. J., 122, 553–555 (1971).
32. Finch C. E. Expl. Gerontol., 7, 53–67 (1972).
33. Finch C. E., Foster J. R., Mirsky A. E. J. Gen. Physiol., 54, 690–712 (1969).
34. Florini J. R. Exp. Aging Res., 1, 137–144 (1975).
35. Franklin T. J. Biochem. J., 82, 118–122 (1962).
36. Gandhi B. S. Biochemical changes in aging rats: Malate dehydrogenase and monoamine oxidase, Ph. D. Thesis, Banaras Hindu University (1972).
37. Gershon D. Mech. Age. Dev., 9, 189–196 (1979).
38. Gershon H., Gershon D. Mech. Age. Dev., 2, 33–42 (1973).
39. Gershon H., Gershon D. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 70, 909–913 (1973).
40. Goodfriend F., Kaplan N. O. J. biol. Chem., 239, 130–135 (1964).
41. Goodfriend T. L., Sokol D. M., Kaplan N. O. J. molec. Biol, 15, 18–31 (1966).
42. Gregerman R. I. Amer. J. Physiol, 137, 63–64 (1959).
43. Gupta S. K., Rothstein M. Arch. Biochem. Biophys, 174, 333–338 (1976).
44. Gupta S. K., Rothstein M. Biochim. Biophys. Acta, 445, 632–644 (1976).
45. Hall J. C. Expl. Gerontol, 4, 207–222 (1969).
46. Hollander J., Barrows C. H., Jr. J. Gerontol, 23, 174–179 (1968).
47. Holliday R. Nature, 221, 1224–1228 (1969).
48. Holliday R., Tarrant G. M. Nature, 238, 26–30 (1972).
49. lmamura K., Taniuchi K., Tanaka T. J. Biochem, 72, 1001–1015 (1972).
50. James T. C, Kanungo M. S. Biochim. Biophys. Acta, 538, 205–211 (1978).
51. Kaldor G., Min B. K. Fed. Proc, 34, 191–194 (1975).
52. Kanungo M. S. Biochem. Rev, 41, 13–23 (1970).
53. Kanungo M. S, Gandhi B. S. Proc. Nat. Acad. Sci, USA, 69, 2035–2038 (1972).
54. Kanungo M. S, Patnaik S. K. In: Regulation of Growth and Differentiated Function in Eukaryote Cells (G. P. Talwar, Ed.), 479–490, Raven Press, New York (1975).
55. Kanungo M. S., Singh S. N. Biochem. Biophys. Res. Commun, 21, 454–459 (1965).
56. Kanungo M. S., Patnaik S. K., Koul O. Nature, 253, 366–367 (1975).
57. Kaur G., Kanungo M. S. Can. J. Biochem, 48, 203–206 (1970).
58. Kaur G, Kanungo M. S. Ind. J. Biochem, 7, 122–125 (1970).
59. Kirk J. E. 4th Int. Congr. Geront, 1, 288–291 (1957).
60. Kirk J. E. Ann. N. Y. Acad. Sci, 72, 1006–1015 (1959).
61. Kirk J. E. J. Gerontol, 14, 288–291 (1959).
62. Kirk J. E. J. Gerontol, 14, 181–188 (1959).
63. Kirk J. E. 1. Gerontol, 14, 447–449 (1959).
64. Kirk J. E. J. Gerontol, 16, 25–28 (1961).
65. Kirk J. E. J. Gerontol, 16, 243–246 (1961).
66. Kirk J. E. J. Gerontol, 17, 154–157 (1962).
67. Kirk J. E. Weselowski and Dennis Fundamentals of Vascular Ageing, 32–62, McGraw-Hill, New York (1963).
68. Kirk J. E. J. Gerontol, 20, 357–362 (1965).
69. Kirk J. E. J. Gerontol, 21, 420–425 (1966).
70. Kirk J. E., Ritz E. J. Gerontol, 22, 427–438 (1967).
71. Kirk J. E., Wang N. S., Brandstrupp N. J. Gerontol, 14, 25–31 (1959).
72. Koida M., Lai C. Y., Horecker B. L. Arch. Biochem. Biophys, 134, 623–631 (1969).
73. Kurnick N. B., Kernen R. L. J. Gerontol., 17, 245–253 (1962).
74. Lang C. A., Stephen J. K. Biochem. J., 102, 331–337 (1967).
75. Latner A. L, Skillen A. W. J. Embryol. Exp. Morphol., 12, 501 (1964).
76. Maier N., Haimovici H. Proc. Soc. exp. Biol. Med., 95, 425–429 (1957).
77. Mainwaring W. I. P. Gerontologia, 14, 133 (1968).
78. Marked C. L., Möller F. Proc. Nat. Acad. Sci, USA, 45, 753–762 (1959).
79. Marked C. L., Ursprung H. Devi. Biol., 5, 363–381 (1962).
80. Mays L. L., Borek E., Finch C. E. Nature., 248, 411–413 (1973).
81. Moudgil V. K., Kanungo M. S. Biochim. Biophys. Acta, 329, 211–220 (1973).
82. Nicolosi R. J., Baird M. B., Massie H. R., Samis H. V. Expl. Gerontol., 8, 101–108 (1973).
83. Oeriu S., Cotescu G., Teodorescu O., Soimu I. Studii Cere. Biochim., 5, 337–340 (1962).
84. Orgel L. E. Proc. Nat. Acad. Sci, USA, 49, 517–521 (1963).
85. Osterman J., Fritz P. J., Wuntch T. J. biol. Chem., 248, 1011–1018 (1973).
86. Patnaik S. K., Kanungo M. S. Biochem. Biophys. Res. Commun., 56, 845–850 (1974).
87. Patnaik S. K., Kanungo M. S. Ind. J. Biochem. Biophys., 13, 117–124 (1976).
88. Rahman Y. E., Peraino C. Expl. Gerontol., 8, 93-100 (1973).
89. Rao S. 5, Kanungo M. S. Mech. Age. Dev., 1, 61–70 (1972).
90. Rao S. S., Kanungo M. S. Ind. J. Biochem. Biophys., 11, 208–212 (1974).
91. Ratha B. K., Kanungo M. S. Biochem. Biophys. Res. Commun., 76, 925–929 (1977).
92. Reiss U., Rothstein M. J. biol. Chem., 250, 826–830 (1975).
93. Reiss U., Gershon D. Eur. J. Biochem. 63, 617–623 (1976).
94. Ritz E., Kirk J. E. J. Gerontol, 22, 433–438 (1967).
95. Ross M. H., Ely J. O. J. Franklin Inst., 285, 63–66 (1954).
96. Roth G. S., Karoly K., Britton V. J., Adelman R. C. Expl. Gerontol., 9, 1-12 (1974).
97. Schmuckler M., Barrows C. H., Jr. J. Gerontol., 21, 109–111 (1966).
98. Schmuckler M., Barrows C. H., Jr. J. Gerontol., 22, 13 (1967).
99. Shaw C. R., Barto E. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 50, 211–214 (1963).
100. Singh S. N., Kanungo M. S. J. biol. Chem., 243, 4526–4529 (1968).
101. Singhal R. L. J. Gerontol., 22, 77–82 (1967).
102. Singhal R. L. J. Gerontol., 22, 343–347 (1967).
103. Singhal R. L., Valadares J. R. E., Ling G. M. Amer. J. Physiol., 217, 793–797 (1969).
104. Sohal R. S., McCarthy J. M. Expl. Gerontol., 8, 223–227 (1973).
105. Srivastava S. K. Biochemical changes in rats during aging: muscle proteins: Creatine phosphokinase, Myosin and Actin, Ph. D. Thesis, Banaras Hindu University (1977).
106. Steinhagen-Thiessen E., Hilz H. Mech. Age. Dev., 5, 447–457 (1976).
107. Steward F. C. Science., 143, 20–27 (1964).
108. Turner D. C., Eppenberger H. M. Enzyme, 15, 224–238 (1973).
109. Wang K., Kirk J. E. J. Gerontol, 14, 444–446 (1959).
110. Wieland T., Pfleiderer H. Biochem. Z., 329, 112–116 (1957).
111. Wilson P. D. Gerontologia, 18, 46–54 (1972).
112. Wilson P. D. Gerontologia, 19, 79-125 (1973).
113. Wilson P. D., Franks L. H. Gerontologia, 17, 16–32 (1971).
114. Zorzoli A. J. Gerontol., 17, 359–362 (1962).
115. Zorzoli A., Li J. B. J. Gerontol., 22, 151 (1967).
116. Zuckerkandl E. Sci. American, 212, 110–118 (1965).
