Текст книги "Биохимия старения"
Автор книги: Роберт Сапольски
сообщить о нарушении
Текущая страница: 12 (всего у книги 19 страниц)
6. Andres R., Tobin J. D. In: The Handbook of the Biology of Aging (C. E. Finch and L. Hayflick, Eds.), 357–378, Reinhold, New York (1977).
7. Baizman E. R., Cox B. Life Sci., 22, 519–529 (1978).
8. Beato M., Kallmi M., Feigelson P. Biochem. Biophys. Res. Commun., 47, 1464–1472 (1972).
9. Bellamy D. Humoral Control of Growth and Differentiation, Vol. 11, 220–279, Academic Press, New York and London (1973).
10. Berg A. P., Zimmerman J. D. Mech. Age. Dev., 4, 377–383 (1975).
11. Bitensky M. W., Russell V., Blanco M. Endocrinology, 86, 154–159 (1970)
12. Brown-Sequard C. E. C R. Soc. Biol., 41, 415–418 (1889).
13. Bylund D. B., Tellez-Inon M. T., Hollenberg M. D. Life Sci., 21, 403–410 (1977).
14. Chainy G. B. N. Metabolic changes during aging, Ph. D. Thesis, Banaras Hindu University (1977).
15. Chainy G. B. N., Kanungo M. S. Biochem. Biophys. Res. Commun., 72 777–781 (1976).
16. Chainy G. B. N., Kanungo M. S. J. Neurochem., 30, 419–427 (1978).
17. Chainy G. B. N., Kanungo M. S. Biochem. Biophys. Acta, 540, 65–72 (1978)
18. Cooper B., Gregerman R. J. J. Clin. Invest., 57, 161–168 (1976).
19. Cuatrecasas P. Ann. Rev. Biochem., 43, 169–214 (1974)
20. Dove G. A., Morley F.t Batchelor A., Lunn S. F. J. Reprod. Fert 24 1–8 (1971).
21. Ericsson E., Lundholm L. Mech. Age. Dev., 4, 1–6 (1975).
22. Everitt A. V., Delbridge L. In: Hypothalamus, Pituitary and Aging (A. V. Everitt and J. A. Burgess, Eds.), 193–208, C. C. Thomas, Springfield (1976).
23. Finch C. E. In: Handbook of the Biology of Ageing (C. E. Finch and L. Hayflick, Eds.), 262–280, Reinhold, New York (1977).
24. Finch C. E., Foster J. R.t Minsky A. E. J. Gen. Physiol., 54, 690–712 (1969).
25. Freeman C, Karoly K, Adelman R. C. Biochem. Biophys. Res. Commun., 54, 1573–1580 (1973).
26. Gregerman R. I., Bierman E. L. In: Textbook of Endocrinology (R. H. Williams, Ed.), 1059–1070, Saunders, Philadelphia (1974).
27. James T. C. Biochemical changes during aging in mammals. Ph. D. Thesis, Banaras Hindu University, Varanasi (1976).
28. James T. C., Kanungo M. S. Biochem. Biophys. Res. Commun., 72, 170–175 (1976).
29. James T. C., Kanungo M. S. Biochim. Biophys. Acta, 538, 205–211 (1978).
30. Kanungo M. S., Patnaik S. K., Koul O. Nature, 253, 366–367 (1975).
31. Kanungo M. S., Gandhi B. S. Proc. nat. Acad. Sci., USA, 69, 2035–2038 (1972).
32. Kent J. R., Acone A. B. In: Androgen in Normal and Pathological Conditions, Intern. Cong. Ser. No. 101, p. 31, Excerpta Medica, Amsterdam (1966).
33. Maggi A., Schmidt M. J., Ghetti B., Enna S. J. Life Sci., 24, 367–374 (1979).
34. Manganiello V., Vaughan J. J. Lipid. Res., 13, 12–16 (1972).
35. Matusik R. J., Rosen J. M. J. Lipid Res., 13, 12–16 (1978).
36. McKnight G. S. Cell, 14, 403–413 (1978).
37. Morita L., Koshihara Y., Kawamura M., Murota S. Biochim. Biophys. Acta (1980). In press.
38. Moudgil V. K., Kanungo M. S. Comp. Gen. Pharmacol., 4, 127–130 (1973).
39. Moudgil V. K., Kanungo M. S. Biochem. Biophys. Acta, 329, 211–220 (1973).
40. Nissenson R., Flouret G., Hetcher O. Proc. nat. Acad. Sci., USA, 75, 2044–2048 (1978).
41. Patnaik S. K., Kanungo M. S. Biochem. Biophys. Res. Commun., 56, 845–850 (1974).
42. Paulose C. S. Macromolecular changes as a function of age of the rat, Ph. D. Thesis, Banaras Hindu University, Varanasi, India (1978).
43. Puri S. K., Volicer. Mech. Age Dev., 6, 61–70 (1977).
44. Rao S. S., Kanungo M. S. Mech. Age. Dev., 1, 61–70 (1972).
45. Rao S. S., Kanungo M. S. Ind. J. Biochem. Biophys., 11, 208–212 (1974).
46. Ratha B. K., Kanungo M. S. Mech. Age. Dev., 3, 187–190 (1974).
47. Ratha B. K., Kanungo M. S. Mech. Age Dev., 6, 431–439 (1977).
48. Raymond V., Meaulieu M., Labrie F., Boissier Jr. Science, 200, 1173–1175 (1978).
49. Rosenbloom A. L., Goldstein S., Yip C. C. Science, 193, 412–415 (1976).
50. Roth G. S. Endocrinology, 94, 82–90 (1974).
51. Roth G. S. Brain Res., 107, 345–354 (1976).
52. Roth G. S. In: The Genetics of Aging (D. H. Harrison, Ed.), 365–384, A. R. Liss, New York (1978).
53. Roth G. S. Mech. Age. Dev., 9, 497–514 (1979).
54. Rousseau G. G., Baxter J. D., Tomkins G. H. J. molec. Biol., 67, 99-115 (1972).
55. Shain S. A., Boesel R. W., Axelrod L. R. Arch. Biochem. Biophys., 167, 247–263 (1973).
56. Shire J. M. Nature, 245, 215–216 (1973).
57. Schocken D. D., Roth G. S. Nature, 267, 856 (1977).
58. Singer S., Ito H., Litwack G. Intern. J. Biochem., 4, 569–573 (1973).
59. Spelsberg T. C., Steggles A. W., O'Malley B. W. Biochim. Biophys. Acta, 256, 129–137 (1971).
60. Strehler B. L. Time, Cells and Aging, Academic Press, New York and London (1977). [Имеется перевод 1-го изд.: Стрелер Б. Время, клетки и старение. – М.: «Мир», 1964.]
61. Verzar F., Spichtin H. Gerontologist, 12, 48–56 (1966).
62. Walker J. B., Walker J. P. Brain Res., 54, 391–394 (1973).
63. Wodinsky J. Science, 198, 948–951 (1978).
Глава 6. Образование поперечных сшивок, свободные радикалы и старческий пигмент
Введение
Клетка представляет собой чрезвычайно сложный и динамический химический организм, в котором с помощью ферментов, синтез которых регулируется генами, постоянно образуются различные метаболиты, гормоны и другие сопутствующие вещества. Хотя в основном эти сопутствующие вещества необходимы для клетки или для организма, некоторые из них, если они накапливаются в количестве, превышающем определенный уровень, оказывают вредное действие. Например, промежуточные продукты цикла Кребса имеют отрицательные заряды и могут образовывать поперечные сшивки молекул, обладающих положительными зарядами. Ряд альдегидов обладает высокой реакционной способностью и может вызывать сшивки биомолекул. Известно, что некоторые гормоны оказывают вредное действие, если они накапливаются в количестве, превышающем определенный уровень. Некоторые соединения, например свободные радикалы, образуются в клетках при действии ионизирующей радиации, а также в реакциях окисления, постоянно в них протекающих. Они высоко реакционноспособны и могут инициировать образование поперечных сшивок биомолекул. Следовательно, их необходимо инактивировать или удалять из системы с такой же скоростью, с какой они образуются. Если опасные сопутствующие продукты не удалять, они могут вызывать инактивацию важных биомолекул и накопление поврежденных молекул. Некоторые исследователи полагают, что такие вредные вещества с возрастом накапливаются, так как клетки постепенно теряют способность удалять их с такой же скоростью, с какой они образуются. Подобные изменения могут нарушать функционирование клеток и вызывать старение организма.
Агенты, инициирующие образование поперечных сшивок
Бьёркстен в 1962 г. предположил, что накопление внутри и вне клеток агентов, вызывающих образование поперечных сшивок, приводит к необратимой инактивации функциональных молекул и вызывает нарушение функций организма. Сшивающие агенты могут возникать в процессе нормального метаболизма. К ним относятся альдегиды и молекулы, содержащие одну или несколько ионизированных групп. В молодом возрасте они расходуются в нормальных метаболических процессах, а в старческом накапливаются [4]. В случае если они связываются с биомолекулами, например с ДНК или ферментами, они уже не могут быть удалены и необратимо инактивируют эти молекулы. Верцар высказал предположение [52–54], что увеличение количества нерастворимого коллагена с возрастом происходит из-за образования поперечных сшивок в молекулах пептидов (гл. 4). Считают также, что уменьшение экетрагируемости белков хромосом из хроматина объясняется увеличением числа их сшивок с молекулами ДНК (гл. 2).
Свободные радикалы
Агентами, вызывающими поперечные сшивки, могут служить также свободные радикалы [20, 21]. Теория сшивок и свободно-радикальная теория старения, предложенные соответственно Бьёркстеном (1962) и Харманом (1962), близки, так как обе они включают инактивацию биомолекул в результате поперечных сшивок. Единственное различие между этими теориями заключается в том, что свободные радикалы, обладающие высокой реакционной способностью, кроме сшивок, могут вызывать и другие повреждения.
Свободными радикалами называют атомы или молекулы, имеющие неспаренный электрон. Они обладают высокой реакционной способностью и инициируют образование различных продуктов. В разных организмах найдено значительное количество радикалов [19, 35, 36]. Они могут возникать в клетке по многим механизмам, в основном в органеллах, генерирующих энергию, таких, как митохондрии и хлоропласты. Свободные радикалы образуются в ходе обычного окисления органических соединений молекулярным кислородом; их возникновение катализируется металлами, например медью и железом, согласно следующим схемам:
или
Fe2+ катализирует образование радикалов согласно реакции
Все свободные радикалы обладают рядом определенных свойств и высокой реакционной способностью. Они парамагнитны, так как имеют магнитный момент благодаря наличию неспаренного электрона. Их свободная энергия выше, чем у частиц, из которых они образовались, и они активно окисляют соседние молекулы. Радикалы инициируют перекисное окисление ненасыщенных жирных кислот. Это приводит к разрушению биологических мембран, содержащих фосфолипиды – эфиры глицерина и ненасыщенных жирных кислот.
Свободные радикалы легко разрушаются вследствие их активной природы и способны образовывать аддукты или инициировать сшивки биологических молекул. Поэтому они обычно инактивируются ферментами типа пероксид-дисмутазы (ПОД), под действием которой происходит дисмутация или перегруппировка двух молекул супероксида:
Каталаза затем катализирует дальнейшее превращение двух молекул перекиси водорода
Супероксид-ион и перекись водорода, образующиеся в клетке, взаимодействуют друг с другом согласно реакции
Радикал ȮH может присоединяться по двойной связи между 5-м и 6-м положениями в молекуле тимидина и нарушать активность ДНК. Радикалы ȮН и НȮ2 чрезвычайно реакционноспособны [40] и имеют очень короткое время полужизни. Радикалы ȮН образуются вместе с гидратированными электронами при действии ионизирующей радиации. Эти радикалы постоянно возникают в организме, и если бы не существовало механизмов, с помощью которых они разрушаются с той же скоростью, что и образуются, то они вызывали бы быструю инактивацию биологических молекул.
К биологическим молекулам, способным помимо ПОД удалять из клетки свободные радикалы, относится витамин Е. Это антиоксидант, защищающий ненасыщенные жирные кислоты от перекисного окисления и препятствующий "размножению" свободных радикалов в ходе перекисного окисления липидов [48]. Сообщается, что другой антиоксидант, этоксихин, увеличивает продолжительность жизни лабораторных мышей на 15–20 %. Когда в пищу мышей добавляли антиоксиданты 2,6-дитрет-бутил-4-метилфенол и меркаптоэтиламин, продолжительность жизни животных возрастала на 30–40 % [22]. Установлено, что антиоксиданты, которые замедляют реакции, протекающие с образованием радикалов как промежуточных продуктов, увеличивают длительность жизни Turbatrix [15]. Таким образом, свободные радикалы и другие агенты, вызывающие сшивки, по-видимому, нарушают функционирование биологических молекул. Однако предстоит еще выяснить, почему они не удаляются или не инактивируются в организме более старых животных так же эффективно, как в организме молодых. Данных о том, что в короткоживущих организмах радикалы генерируются или аккумулируются с большей скоростью, чем в долгоживущих, нет. Не показано также, что уровень радикалов в старых организмах выше, чем в молодых. Кроме того, радикалы являются вторичными продуктами метаболизма и, следовательно, вряд ли могут быть первичной причиной старения.
К потенциальным сшивающим агентам относятся различные альдегиды. Среди них – формальдегид (НСНО), который образуется по меньшей мере в восьми метаболических реакциях, известных до сих пор [4, 5]. Он способен сшивать основания ДНК и инактивировать ее.
Старческий пигмент
Старческий пигмент, называемый также липофусцином («липо» – жир, «фусцин» – темный), впервые был обнаружен Ходжем в 1894 г. в цитоплазме нейронов старых организмов. Его образование относится к наиболее очевидным и легко наблюдаемым изменениям, возникающим в неделящихся клетках, таких, как нейроны и клетки скелетных мышц [1, 6, 8, 9, 12, 23, 29, 38, 45, 50]. Накопление старческого пигмента в коре и гиппокампе головного мозга человека [17], макака-резуса [11] и крысы [8, 10] является одним из постоянных морфологических признаков старения. Возможно, это накопление служит одной из причин потери нейронов [7, 10, 11]. Липофусцин образуется также и в делящихся клетках, например в клетках печени [16], коры надпочечников [47] и семенников [29]. Откладывание пигмента усиливается при введении кортизона, недостатке витамина Е, гипоксии [42, 46] и при некоторых патологических состояниях, возникающих в раннем возрасте [41]. Его накопление вызывает пропорционально усиливающееся разрушение цитоплазматических структур, например уменьшение массы цитоплазмы, числа митохондрий, шероховатого эндоплазматического ретикулума, упрощение аппарата Гольджи и образование в цитоплазме вакуолей [39] (рис. 6.1).
Рис. 6.1. Изменение с возрастом доли объема клетки, занимаемой липофусцином, цитоплазмой и ядром в больших нервных клетках из nucleus deviatus мозжечка [51].
1 – липофусцин; 2 – цитоплазма; 3 – ядро
Источник образования старческого пигмента пока не выявлен. Ряд исследователей высказывается в пользу лизосом, так как с процессом его образования связаны некоторые гидролазы [2, 12, 14, 44, 50]. Другие [13, 18, 24] считают, что источником липофусцина являются митохондрии. Они предполагают, что он образуется при перекисном окислении полиненасыщенных липидов в этих клеточных органеллах [44, 48]. Липофусцин представляет собой весьма сложное, имеющее сопряженные связи и поперечные сшивки соединение, которое накапливается, как правило, в цитоплазме неделящихся клеток – нейронов, клеток сердечной и скелетной мышц. У крыс его накопление в аэробных тканях интенсивнее, чем в анаэробных [39]. При освещении ультрафиолетовым светом наблюдается его флуоресценция с масимумом между 430 и 490 нм. Липофусцин окрашивается Суданом черным, нильским голубым и ШИК-положителен.
Некоторые ферменты, например кислые и щелочные фосфатазы и глюкуронидаза, образуют с ним ассоциаты. В состав липофусцина входят металлы – цинк и кальций, углеводы, белки и в больших количествах нейтральные и кислые полимерные липиды. Пигмент хорошо растворяется в кислотах. В некоторых тканях его концентрация линейно увеличивается с возрастом, возможно, потому, что клетки утрачивают способность его удалять. Например, его количество линейно возрастает в семенниках мышей [29]. В основном его накопление происходит в клетках Сертоли и интерстициальных клетках, но не в сперматогонии. Высокая способность сперматогония препятствовать накоплению пигмента может быть интересной темой исследования. Накопление липофусцина в гиппокампе и зрительной коре старых крыс протекает быстрее, чем у молодых животных, причем с возрастом одновременно уменьшается количество клеток [10]. Все это должно воздействовать на функции мозга.
Появление в цитоплазме больших количеств неактивного пигмента должно, очевидно, инактивировать клетку. У старых мух Drosophila до 50 % объема клеток занято липофусцином [1]. Однако, если сравнить его содержание у диких дрозофил и у редкого мутанта, имеющего более короткую продолжительность жизни, никакой корреляции не наблюдается. В том и в другом случае пигмент накапливается с одинаковой скоростью. Таким образом, перекисное окисление липидов и накопление старческого пигмента не имеют явного отношения к уменьшению продолжительности жизни. Раннее накопление пигмента наблюдается у людей, страдающих наследственной болезнью– нейронным цероидлипофусцинозом (синдром Баттена – Фогта), а также у собак с ювенильной амавротической идиотией [55]. Значительное отложение пигмента наблюдается у людей, больных хореей Гентингтона и старческим слабоумием.
Липофусцин, очевидно, является побочным продуктом метаболизма и сам не метаболизируется, однако такие лекарственные препараты, как центрофеноксин (β-хлорфеноксиацетиловый эфир диметиламиноэтанола) и диметиламиноэтанол, уменьшают его отложение в нейронах морских свинок и мышей. Введение центрофеноксина в течение 12 нед или более приводит к заметному уменьшению количества старческого пигмента в мозгу морских свинок, крыс и мышей [25, 26, 28, 32, 37, 43]. В нейронах коры головного мозга мышей в возрасте одного месяца старческого пигмента не обнаружено. Он появляется в возрасте 2–3 мес, и затем его количество постепенно возрастает. В гиппокампе обнаружено больше старческого пигмента, чем в коре головного мозга. Если мышам-самкам ежедневно вводить внутрибрюшинно центрофеноксин (80 мг·кг-1 веса) начиная с месячного возраста в течение 2-11 мес, накопление липофусцина в нейронах коры головного мозга и гиппокампа заметно уменьшается (рис. 6.2 и 6.3) [33, 34]. После введения препарата в течение 3 мес улучшаются обучаемость и память 11-12-месячных мышей. Было сделано заключение, что центрофеноксин вызывает разрушение старческого пигмента и тем самым препятствует его накоплению [25, 43]. Хотя несколько исследователей показали, что этот препарат уменьшает накопление липофусцина, остается неясным, происходит ли это из-за предотвращения его отложения или из-за удаления уже отложившегося пигмента. Кроме того, необходимо учесть и оценить побочные эффекты от употребления высоких доз препарата.
Рис. 6.2. Окрашивание липофусцина нильским голубым в нейронах коры головного мозга мышей в возрасте 6 мес; ×600 [33, 34].
А. Контроль. Б. После введения центрофеноксина в течение 5 мес
Рис. 6.3. Окрашивание липофусцина нильским голубым в нейронах коры головного мозга мышей в возрасте 12 мес; ×600 [33, 34].
А. Контроль. Б. После введения центрофеноксина в течение 11 мес
Старческий пигмент начинает накапливаться по мере старения в цитоплазме Neurospora crassa. При введении нордигидрогваяретовой кислоты (НДГ), обладающей свойствами антиоксиданта, не только уменьшается его накопление, но и увеличивается продолжительность жизни [30]. НДГ и глутатион оказывают такое же действие на Podospora anserina [31].
Причины накопления старческого пигмента еще предстоит выяснить. Если это происходит из-за нарушений метаболизма, необходимо установить, какие факторы ответственны за эти нарушения. Очевидно, однако, что накопление липофусцина является лишь вторичной причиной старения.
Литература
1. Biscardi H. M., Webster G. C. Expl. Gerontol., 12, 201–205 (1977)
2. Bjorkerud S. Adv. Gerontol. Res., 1, 257–288 (1964).
3. Bjorksten J. J. Am. Geriat. Soc., 10, 125–139 (1962).
4. Bjorksten J. Theoretical Aspects of Aging (M. Rockstein, Ed.), 43–59, Academic Press, New York and London (1974).
5. Bjorksten J. In: Protein crosslinking: nutritional and medical consequences (M. Friedman, Ed.), 579–602 (1977).
6. Bourne G. H. Neurobiological Aspects of Maturation and Aging. In: Process in Brain Research (D. H. Ford, Ed.), 187–202, Elsevier, New York (1973).
7. Brizzee K. R. In: Neurobiology of Aging (J. M. Ordy and K. R. Brizzee, Eds.), 401–424, Plenum Press, New York (1975).
8. Brizzee K. R., Cancllla P. A., Sherwood N., Timiras P. S. J. Gerontol., 24, 197–135 (1969)
9. Brizzee K. R., Harkin J. C., Ordy J. M., Kaack B. Aging, 1, 39–78 (1975). 10. Brizzee K. R., Ordy J. M. Mech. Age. Dev., 9, 143–162 (1979).
11. Brizzee K. R., Ordy J. M., Kaack B. J. Gerontol., 29, 366–381 (1974).
12. Brodu H., Vijayashankar N. In: The Handbook of the Biology of Aging (C E Finch and L. Hayflick, Eds.), 248–254, Reinhold, New York (1977).
13. Colocolough H. L., Hack M. M., Helmy F. M., Vaughan G. E., Veath D. C. Acta Histochem., 43, 89-109 (1972).
14. DeDuve C. Symp. Soc. exp. Biol., 10, 50–67 (1957).
15. Epstein J., Gershort D. Mech. Age. Dev., 1, 257–264 (1972).
16. Essner E., Novikoff A. J. Ultra Res., 3, 374–391 (1960).
17. Friede R. L. Topographic Brain Chemistry, Academic Press, New York and London (1966).
18. Glees P., Hasan M., Spoerri P. E. J. Physiol., 239, 87 (1974).
19. Gordon P. In: Theoretical Aspects of Aging (M. Rockstein, Ed.), 61–81, Academic Press, New York and London (1974).
20. Harman D. J. Gerontol., 1, 298–300 (1956).
21. Harman D. Radiat. Res., 16, 753–763 (1962).
22. Harman D. J. Gerontol., 23, 476–482 (1968).
23. Hasan M., Glees P. Expl. Gerontol., 7, 345–351 (1972).
24. Hasan M., Glees P. Expl. Gerontol., 8, 78–83 (1973).
25. Hasan M., Glees P., Spoerri P. E. Cell Tiss. Res., 150, 369–375 (1974).
26. Hochschild R. Expl. Gerontol., 8, 117–183 (1973).
27. Hodge C. F. J. Physiol., 17, 129–134 (1894).
28. Kormendy C. G., Bender A. D. Gerontologia, 77, 52–64 (1971).
29. Miquel J., Lundgren P. R., Johnson J. E. J. Gerontol., 33, 5-19 (1978).
30. Munkres K. D., Rana R. S. Mech. Age. Dev., 7, 399–406 (1978).
31. Munkres K. D., Rana R. S. Mech. Age. Dev., 7, 407–415 (1978).
32. Nandy K., Bourne G. H. Nature, 210, 313–314 (1966).
33. Nandy K. Mech. Age. Dev., 8, 131–138 (1978).
34. Nandy K. J. Am. Gerontol. Soc, 26, 74–81 (1978).
35. Pryor W. A. Sci. Amer, 23, 70–83 (1970).
36. Pryor W. A. Fed. Proc, 32, 1862–1869 (1973).
37. Riga S., Riga D. Brain Res., 72, 265–275 (1974).
38. Samorajski T., Keefe J. R., Ordy J. M. J. Gerontol., 19, 262–276 (1964).
39. Shimasaki H., Nozawa T., Privett O. S., Anderson W. R. Arch. Biochem. Biophys., 183, 443–451 (1977).
40. Sinex F. M. In: The Handbook of the Biology of Aging (C. E. Finch and L. Hayflick, Eds.), 43–46, Reinhold, New York (1977).
41. Spence A. M., Herman N. M. Mech. Age. Dev., 2, 211–227 (1973).
42. Spoerri P. E., Glees P. Expl. Gerontol., 8, 259–263 (1973).
43. Spoerri P. E., Glees P. Mech. Age. Dev., 3, 131–155 (1974).
44. Strehler B. L. Adv. Gerontol. Res., 1, 343–384 (1964).
45. Strehler B. L., Mark D. D., Mildvan A. S., Gee M. V. J. Gerontol., 14, 430–439 (1951).
46. Sulkin N. M., Srivanji P. J. Gerontol, 15, 2–9 (1960).
47. Szabo D., Desinick C., Okros L., Stack E. Expl. Gerontol., 5, 335–337 (1970).
48. Tappet A. L. Ann. N. Y. Acad. Sci., 203, 12–28 (1972).
49. Tonna E. A. Expl. Gerontol., 8, 9-16 (1973).
50. Tonna E. A. J. Gerontol., 30, 3–8 (1975).
51. Treff W. M. Altern, 37–54, Schattauer, Stuttgart (1974).
52. Verzar F. Gerontologia, 4, 104–111 (1960).
53. Verzar F. Sci. Amer., 208, 104–114 (1963).
54. Verzar F. Intern. Rev. Connect. Tissue Res., 2, 243–299 (1964).
55. Zeman W. Adv. Gerontol. Res., 3, 147–170 (1971).
