Текст книги "Искусственное осеменение собак"

Автор книги: М. Миролюбов

Соавторы: Р. Равилов,В. Иванов
сообщить о нарушении

Текущая страница: 2 (всего у книги 2 страниц)

8. РАЗБАВЛЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ

На сегодняшний день существуют следующие методы хранения спермы:

1. Кратковременное хранение при комнатной температуре в течение не более 4-х часов. Используется как разбавленная, так и неразбавленная сперма. Разбавляют сперму пастеризованным молоком 1:8. При осеменении свежеполученной спермой, получают результаты оплодотворяемости, сравнимые с естественной случкой. Процент положительных результатов – около 85%, практически, как при естественном осеменении.

2. Хранение при температуре +5°С

Эякулят сразупосле получения и оценки, разбавляют специальной синтетической средой и сохраняют в охлажденном до +5°С состоянии (в обычном холодильнике) в течение 2—4 суток. Это позволяет транспортировать сперму.

В качестве разбавителя используют различные среды, в состав которые входят вещества, оказывающие защитное влияние на половые клетки.

Разбавители по Шетцу:

1) сухой порошок молока – 10,0; желток куриного яйца 10,0: вода дистиллированная – до 100,0.

2) 2%-ный раствор глицерина с желтком.

3) 5—6%-ная глюкоза или фруктоза с желтком.

4) 3%-ный натрий-цитрат с желтком.

Разбавитель по Баутиной Е.П.: гликокол – 1,82; цитрат натрия – 0,72; желток куриного яйца 5,0; вода дистиллированная до 100,0.

Процедура осеменения собак охлажденной спермой аналогична таковой при использовании свежеполученной спермы, но перед введением в половые пути суки подогревают дозу спермы в водяной бане.

В случае применения высококачественных разбавителей и проведения осеменения в оптимальное по отношению к овуляции время, возможно, получать от охлажденной спермы высокую (75—80%) оплодотворяемость. Но обычно результативность осеменения охлажденной спермой на 20% ниже, по сравнению с использованием свежеполученной спермы.

3. Хранение в жидком азоте (-196°C)

Метод предусматривает использование замороженной в жидком азоте спермы. Срок годности спермы практически не ограничен.

При использовании для искусственного осеменения замороженной спермы, необходимо соблюдать определенные зооветеринарные требования.

Центры по криоконсервации спермы собак работают во многих странах мира и используют практически одинаковые методы её замораживания, но при этом применяют различные синтетические разбавители, в том числе и патентованные.

Сперму кобелей обычно замораживают в виде гранул объёмом 0,2 мл или в полипропиленовых соломинках объемом 0,25 мл. Преимуществами замораживания спермы в соломинках являются лучшие условия стерильности и возможность их маркировки данными о производителе: порода, кличка, дата взятия семени и т. д.

Оттаивают сперму, замороженную в гранулах, при 37°С в изотонических растворах, а соломинки – в водяной бане при 35—37°С.

При использовании замороженной спермы на оплодотворяемость сук оказывают влияние многие факторы: состав синтетической среды, качество спермы, температура ее оттаивания, число биологически полноценных спермиев в дозе, время осеменения, техника осеменения и место введения спермы в половые пути суки.

В дозе спермы перед замораживанием должно содержаться не менее 150—200 млн подвижных спермиев.

Сразу после получения и оценки, эякулят разбавляют в 2—3 раза специальным криозащитным разбавителем, содержащим различные вещества, предохраняющие спермии от повреждений во время замораживания. В частности, в их состав обязательно входят глицерин и желток куриного яйца.

Состав разбавителя:

ТРИС 6,06 гр; фруктоза 2,5 гр: лимонная кислота 3,4 гр; дистиллированная вода 184 гр; глицерин 8 гр; желток 20 гр; трициллин 0,5 гр.

После разбавления сперму охлаждают в холодильнике в течение 2—3 часов до +4°С, а затем замораживают с использованием жидкого азота до температуры -196°С.

При хранении замороженной спермы в жидком азоте (в сосуде Дьюара), она способна сохранять биологическую полноценность в течение многих десятков лет.

Поскольку, в процессе замораживания-оттаивания разрушается до 50%спермиев, желательно вводить дозу непосредственно в полость матки. Процент положительных результатов до 60%.

9. ВЫБОР ОПТИМАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ ДЛЯ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ

Причиной бесплодия часто бывает неправильный выбор времени искус венного осеменения.

По клиническим проявлениям. От появления у суки первых коровянистых выделений искусственное осеменение проводят на 11 – 14 день двукратно с интервалом 48 часов, с учетом феномена охоты (на 3—4 день от начала охоты). Также учитывают отёк вульвы – примерно, через четыре дня от начала уменьшения отёка.

Цитологическое исследование влагалищного мазка. Мазок берут с верхнего свода влагалища, окрашивается любым известным способом. Случка проводится в момент, когда более 60% эпителиальных клеток являются безъядерными и в мазке отсутствуют полиморфно-ядерные лейкоциты.

Эндоскопическое исследование. Искусственное осеменение проводят в период, когда уменьшается отёчность продольных складок влагалища, количество вторичных складок уменьшается и они становятся бледными.

Измерение уровня гормонов. Определяют с помощью ИФА. Искусственное осеменение проводят между 4-м и 6-м днём, после того как концентрация прогестерона в плазме превысит 2 нг/мл.

10. МЕТОДЫ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ

Влагалищное осеменение

Инструменты: пластиковый шприц с полужёстким катетером, длиной до 30 см.

Сперму набирают на всю длину катетера (в цилиндр набирать нельзя из-за небольшого объёма спермы, но в нём должен быть достаточные объём воздуха для проталкивания дозы спермы из катетера во влагалище).

После санитарной обработки наружных половых органов катетер вводят во влагалище, при возможности проводят пальпацию катетера и шейки матки через брюшную стенку. Суку приподнимают за задние конечности и опустошают катетер, прогоняя через катетер воздух из шприца.

Рекомендуется проводить пальпаторную стимуляцию клитора в течение 1 -2 минут, так как это вызывает антиперистальтические сокращения влагалища и матки, засасывающие сперму в матку.

Внутриматочное осеменение

Ввести обычный катетер через шейку матки трудно и не всегда возможно, так как влагалище очень узкое (0,8—2 см в диаметре) и длинное (до 20 см), шейка имеет выпячивающуюся влагалищную часть, из-за чего образуются слепые карманы. Поэтому применяют специальные методики и специальные инструменты.

Осеменение катетером Фоли

Классический катетер Фоли имеет на конце рабочей (влагалищной части) баллончик из тонкостенной резины, который при заполнении воздухом раздувается и не дает сперме вытечь из краниальной части влагалища. Баллончик имеет отверстие для второго обычного катетера, который продвигают ближе к шейке матки, изливая на шейку матки сперму. После введения спермы второй катетер втягивают в катетер Фоли, тем самым предотвращая утечку спермы вокруг отверстий катетера. Оба катетера оставляют во влагалище самки на 15 минут.

Осеменение при помощи норвежского катетера (Д. Фогнер)

Норвежский катетер состоит из наружного пластикового катетера и внутреннего – металлического с расширенным и закругленным концом.

Наружный пластиковый катетер вставляется во влагалище суки на уровне шейки матки. Шейку матки пальпируют через брюшную стенку и оттягивают краниально, чтобы сгладить влагалищную часть шейки матки и, внутренний катетер можно было бы ввести через цервикальный канал.

Методика требует большой практики.

Осеменение при помощи эндоскопа

Необходим жесткий эндоскоп с выдвигающимся катетером. Эндоскоп продвигают до шейки матки, отыскивают отверстие шейки матки и вставляют катетер.

Хирургическая методика

Под общим наркозом производится лапаротомия по средней линии живота, тело матки выводят в разрез. С помощью иглы вводят в тело матки внутривенный катетер и сперму через него медленно вводят в матку.

11. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ БЕРЕМЕННОСТИ

Клинико-гинекологическое исследование

Примерно через месяц после осеменения при у беременных сук наблюдаются слизистые выделения в небольшом количестве из вульвы.

При пальпации, через месяц после оплодотворения в брюшной полости прощупываются плотные образования, представляющие собой сферические очертания, диаметром 10—20 см.

С 35 дня наблюдается увеличение массы животного, увеличение молочных желёз и сосков, из молочных желез выделяется серозная жидкость, которая оставляет вокруг сосков тёмные, легкосмываемые пятна С 40-го дня заметно увеличение объёма живота. За неделю до родов наблюдаются предвестники родов (животное строит «гнездо», из сосков появляется молозиво, расслабляются связки таза, расслабляется шейка матки, «опускается» живот и др.).

За неделю до родов при осмотре и пальпации брюшной стенки наблюдается движение плодов.

В последних половине и трети беременности при аускультации или с помощью электрокардиографа можно регистрировать сердцебиение плодов. Частота сердечных сокращений обычно вдвое выше, чем у матери.

Рентгенография

Точная диагностика беременности возможна только с 45-го дня, когда начинается окостеневание скелета. На рентгенограмме просматриваются кости плодов. На поздней стадии беременности можно точно подсчитать количество плодов.

Ультразвуковой контроль беременности и бесплодия

Определить результативность искусственного осеменения, дифференциировать беременность от ее ложного проявления и от воспаления матки на сегодняшний день наиболее доступно с помощью ультразвукового исследования.

БЕРЕМЕННОСТЬ. С 15-го дня беременности (в эмбриональную стадию) амниотические полости выявляются как разрозненные округлые эхонегативные структуры, диаметром 1—1,5 см. На 21 день зародыши выявляются в виде эхонегативных сферических образований, диаметром 10—15 мм, с 32 дня определяется голова, туловище, зачатки конечностей. Скелет позвоночника идентифицируется с 40-го дня. С 45-го дня определяются органы плода.

К 50—58 дню беременности количество жидкости в матке резко уменьшается и наличие плодов данным прибором можно установить только по четкообразному строению позвоночника.

Точное количество плодов с помощью ультразвукового исследования из-за артефакта многократного отражения ультразвуковой волны (акустическое зеркало) выявить не удается.

При патологии беременности, возможно диагностировать замедление частоты сердечных сокращений и снижение двигательной активности плода.

При гибели и гнилостном разложении (эмфиземе) плодов в матке определяется газ от жизнедеятельности микроорганизмов, который на сканограммах создает эхогенные зоны с тенями, затрудняющие исследование, так как через газовые среды ультразвуковые волны не проходят.

БЕСПЛОДИЕ. При бесплодии матка и яичники часто не выявляются. Выявить удается рога матки во время течки, так как в полостях рогов имеется ограниченное количество слизи.

Любой воспалительный процесс сопровождается увеличением диаметра рогов матки и заполнение полости воспалительным экссудатом (анэхогенная или гипоэхогенная структура).

При эндометрите выявляется лишь увеличение диаметра матки и незначительный экссудат в полости матки.

Рис. 2. Ультразвуковая картина при пиометре

При пиометре диаметр рогов значительно увеличен, стенки матки неоднородные, повышенной эхогенности; при железисто-кистозной гиперплазии возможна визуализация кист.

Рис. 3. Ультразвуковая картина при беременности

При гидрометре стенки матки часто истончены, поэтому при поперечном разрезе ультразвуковым сканером, имеют не округлую форму, а форму неправильных пчелиных сот.

При пиометре, гидрометре, железисто-кистозной гиперплазии и других аналогичных заболеваниях, сопровождающихся скоплением в полости матки значительного количества патологического экссудата на сканограмме, в поле зрения могут попадать несколько ультразвуковых срезов одного и того же рога матки, так последний может перегибаться несколько раз.

12. САНИТАРНЫЕ ПРАВИЛА ПРИ ИСКУССТВЕННОМ ОСЕМЕНЕНИИ

При проведении искусственного осеменения сук необходимо строго придерживаться ветеринарно-санитарных правил, установленных ветеринарным законодательством, как и при искусственном осеменении самок других животных.

За 4—5 часов до работы проводят генеральную уборку помещения с помощью не пахнущих дезсредств, облучают бактерицидными лампами.

Наружные половые органы животного тщательно обмывают тёплой водой с мылом, орошают тёплым раствором фурацилина (1:5000), после чего насухо вытирают ватным тампоном.

Перед операцией искусственного осеменения необходимо тщательно мыть руки с мылом, спиртом при помощи щётки, а затем обрабатывать их 70%-ным спиртом, ссадины, подногтевые пространства, сгибы суставов пальцев смазывать 5%-ным йодом, затем одевать одноразовые стерильные перчатки.

Инструменты и оборудование до и после использования стерилизуют и хранят, согласно инструкциям, прилагаемых к ним.

По окончании работы также проводят тщательную механическую очистку помещения с последующей дезинфекцией.

13. ПРИЛОЖЕНИЯ

ИНСТРУКЦИЯ РКФ О РЕГИСТРАЦИИ ПОТОМСТВА, ПОЛУЧЕННОГО ОТ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ СОБАК

Специалист, занимающийся сбором, замораживанием, хранением. осревогскок спермы н осеменением собак замороженной спермой должен иметь договор о сотрудничестве с РКФ и следовать инструкциям, для предотвращения возможной ошибки при кдентифмкацик и регистрации потомства от искусственного осеменения в РКФ.

При этом должна заполняла определенная документация. Все требуемые записи должны оформляться своевременно: непосредственно во время сбора и криоконсервацкн семешс во время перевогиси семени; в период осеменения суки. При этом все необходимые документы должны быть заполнены последовательно, аккуратно н грамотно. Эти документы должны сохраняться не менее б лет с момента последнего осеменения шморо-женной спермой донора.

1. Документы, заполняемые лицом, производящим взятие и криоконсервацию спермы.

а) Данные о собаке-доноре спермы (племенном производителе).

– Порода.

– Кличка.

– Номер родословной РКФ.

– Дата рождения.

– Окрас.

– Кличка отца и матери. Их регистрационные номера.

– Предоставить в РКФ формуляр «Сведения о замороженной сперме посменного кобеля» сразу после заготовки или сбора спермы.

– Необходимо знать дату перевозки собаки к специалисту для взятия и криоконсервации спермы.

– Должен иметь адрес и фамилию специалиста, производящего заготовку криоковсервированной спермы.

– Обязан иметь сведения о количестве замороженных и заложенных на хранение спермодоз от его кобеля.

– Должен знать месторасположение хранилища, где заложена сперма на хранение.

– Должен знать новое месторасположение, куда перевозят сперму его собаки на хранение.

2. Данные, заполняемые владельцем, при покупке замороженной спермы от собаки-донора.

– Число спермодоз, полученных владельцем.

– Дата перевозки спермы к владельцу.

– Адрес, куда семя перевезено.

– Регистрационный номер и кличка суки, планируемой для искусственного осеменения замороженной спермой.

– Контейнер с замороженным семенем должен иметь четкую маркировку (порода, регистрационный номер и кличка собаки-донора, дата заготовки семени).

_______________________________________________________________________________________

организация, проводившая исследование

СЕРТИФИКАТ ОЦЕНКИ ПОТЕНЦИИ КОБЕЛЯ

Выдан ____________________ от ____________________ 200_ г.

проживающему ____________________

в том, что принадлежащий ему кобель ____________________

породы ____________________, возраст____________________

прошел ветеринарную андрологическую оценку.

Фамилия, имя, отчество проводившего исследование ____________________ МП

__________________________________________________

организация, проводившая исследование

ПРОТОКОЛ
ГИНЕКОЛОГИЧЕСКОГО НАСЛЕДОВАНИЯ СУКИ

от ____________________200_ г.

Выдан ____________________

проживающему ____________________

в том, что принадлежащая ему сука ____________________

породы ____________________, возраст____________________

прошла ветеринарную гинекологическую оценку.

Ф.И.О. подпись врача ____________________ МП

_________________________________________

14. СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аллен В.Э. Полный курс акушерства и гинекологии собак. М.: «АКВАРИУМ ЛТД», 2002. – 448 с.

2. Баутина Е.П. Исследование и разработка вопросов технологии искусственного осеменения серебристо-черных лисиц. Автореф. дисс. к.б.н. Дубровины, 1977. – 16 с.

3. Гьера С., Пети С., Бадино Ф. Оплодотворение собак с помощью вязки или искусственного осеменения: Исслед. на 202 собаках. Ветеринар, 1999; № 7—9, – С. 4—8.

4. Гончаров В.П., Карпов В.А. Анатомо-физиологические особенности половой системы собак и кошек: Учеб. пособие; Моск. акад. вет медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. – NL, 1994 – 26 с. ISBN: 5-86341-025-6.

5. Ерохин А.С., Квичко И.Л. Использование свежей, охлажденной и криоконсервированной спермы при искусственном осеменении собак: Обзор иностр. лит. Всероссийский НИИ племенного дела, пос. Лесные поляны, Московская обл. с.-х. биология. Сер. Биология животных, 1998; № 4, – С. 114—120.

6. Ерохин А.С. ВНИИплем, Лехмус И.А., Сейдахметов Б.С. Влияние холодового шока и глубокого замораживания на содержание АТФ в сперматозоидах собак. Селекция, кормление, содерж. с.-х. животных и технология пр-ва продуктов животноводства, 1999; Вып. 8, – С. 51—55.

7. Справочник по болезням собак и кошек / Серия «Ветеринария и животноводство». Ростов н/Д: «Феникс», 2000. – 352 с.

8. Миролюбов М.Х. Человек и собака. Казань, 1992, 64 с.

9. Миролюбов M.X., Волков А.Н. Искусственная вагина для кобеля. Ветеринария, J610, 1993 г, стр. 54—55.

10. Лекалова Т.М. Характеристика эстрального цикла самок песца. Кролиководство и звероводство. №1, 2003 г. с. 13—16.